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高效液相色谱仪的日常维护    

2.1高效液相色谱仪器的开机、关机注意事项。  

一切分析准备工作做好后，依次按顺序打开稳压电源、高压输液泵、柱温箱、检测器，待以上各部件自检结束后，打开连接仪器的电脑，启动工作软件。  

仪器分析工作结束后，关闭工作软件，再依次按顺序关闭检测器、柱温箱、高压输液泵。 

2.2对流动相的要求  

液相色谱所用的流动相一般为低沸点**溶剂与水或者缓冲溶液的混合物。为保证液相色谱仪器的正常使用，所有流动相必须是色谱级的，且经过过滤杂质、排除气泡后装入干净的流动相贮存瓶中待用。  

2.2.1流动相的物理性能要求  

       对分析物要有足够的溶解能力，以利于提高检验的灵敏度；流动相的黏度要小，以保证合适的柱降压；流动相的沸点要低，以利于制备分离时样品的回收；  

2.2.2流动相的温度  

       一般以硅胶为基质的色谱柱较高使用温度不**过60℃，以低于40℃为宜。温度过高会加速键合相水解和硅胶的溶解，从而使填料性质改变，柱塌陷，降低柱效。较低使用温度不**过0℃。  

2.2.3流动相的过滤  

       所有流动相在使用前都必须经过0.45μm（或0.22μm）的**相/脂溶性和水相（水溶性）滤膜过滤，以除去杂质微粒。 

2.2.4流动相的脱气  

       液相色谱所用到的流动相必须预先脱气，否则*在系统内产生气泡，影响泵的工作， 影响基线的稳定性。此外，溶解在流动相中的氧还可能与样品、流动相反应。溶解氧能与某些**溶剂（如甲醛、四氢呋喃）形成有紫外吸收的络合物，提高背景吸收，会在梯度洗脱时造成基线漂移或形成鬼峰。  

常有的脱气方法有以下四种： 

（1） 在线真空脱气法   把真空脱气装置串联到储液系统中，并结合膜过滤器，使流动相在进入输液泵前脱气，此法效果较好，尤其适用于多元溶剂体系。  

（2） 超声波脱气法  此法是实验室较常用的一种方法，将配置好的流动相连同容器一起放入超声波水浴中超声15至30分钟。  

（3） 抽真空脱气法  使用微型真空泵，降压至0.05～0.07MPa即可出去溶解的气体。由于抽真空会引起混合溶剂组成的变化，故对于多元溶剂体系应该先预先脱气后再进行混合，以保证混合后的组分不变。  

2.3泵的维护  含有缓冲盐的流动相不能保留在泵内，尤其是停泵过夜或更长时间。分析结束后一定要先用纯水冲洗泵，然后再换合适溶剂冲洗（一般反相键合固定相，可以是甲醇或者甲醇和水溶液）。